应激下mRNA被选择性翻译？这篇15分+的文章教你如何完美推论！

sp70受体的特异性隐另有整体之外，然而其具体关键作用前提是什么？创作者从eIF4GⅠ的结构上和功用入手，针对eIF4GⅠ上的PABP1、eIF4E、eIF4A、eIF3等紧密结合核糖体，co-IP检测HS前后，eIF4GⅠ与这些受体常与互关键作用的变动，结果讫在WT肝细胞，HS后eIF4GⅠ与PABP1紧密结合增加，与eIF4E紧密结合不受严重影响。在Ogt敲除肝细胞，HS后eIF4GⅠ与PABP1和eIF4E紧密结合不受严重影响。以eIF4E、PABP1为抗体的常与互共硫酸盐讫eIF4E可将粘贴与非粘贴的eIF4GⅠ硫酸盐下来，而PABP1情况下硫酸盐极少的eIF4GⅠ且无O-GlcNAc粘贴，得出新结论了持续性游离的O-GlcNAc粘贴eIF4GⅠ通过表征PABP1重构出新厂成eIF4F（酪氨酸长袍依赖性译文算起）。而O-GlcNAc粘贴eIF4GⅠ显然特异性了长袍依赖性的译文算起，并通过重构eIF4F激活了非长袍依赖性的译文算起，故创作者希望检测持续性情况下下eIF4E对肝细胞膜mRNA吸引力的变动。零距紫外交联+PCR讫，WT三组HS后eIF4GⅠ与Hsp70 (Hspa1a) mRNA紧密结合急剧下降6倍，符合意味著。而敲除OGT后，HS后eIF4GⅠ与Hsp70 (Hspa1a) mRNA紧密结合急剧下降25倍甚至非常大高于WT三组，可先前WB已得出新结论HS后PGT敲除三组Hsp70受体不隐另有，因而肝细胞膜共存大量Hsp70 mRNA却不隐另有，这是SG的特征！体外相结合YFP-flag-eIF4GⅠ和S68A性状质粒转染MEF肝细胞，零距紫外交联+PCR讫，S68A性状三组较WT三组Hsp70 (Hspa1a) mRNA非常大富集。故持续性游离O-GlcNAc粘贴eIF4GⅠ不太可能囚禁了SG中都持续性之外mRNA。

上图3

4、去O-GlcNAc粘贴的eIF4GⅠ特异性了SG的表征【前提探寻2】

SG为不钙，创作者试上图分析eIF4GⅠ、PABP1、eIF4E等受体在HS前后的钙差别。WB讫从HS维持后OGT敲除三组钙eIF4GⅠ数量增加，PABP1和eIF4E举例来说在HS后增加，提讫不太可能是投身于形成肝线粒体外持续性微粒（SG）。必要性免疫荧光讫，HS后，WT三组SG比如说荧光非常大减弱，而OGT敲除三组SG比如说荧光基本上，提讫肝细胞膜忽视O-GlcNAc粘贴导致HS后SG的分解被特异性。那么O-GlcNAc粘贴eIF4GⅠ是否可分解SG，囚禁Hsp70 (Hspa1a) mRNA？FISH讫，WT三组Hsp70 (Hspa1a) mRNA常与当多分布在肝线粒体中都，OGT敲除三组Hsp70 (Hspa1a) mRNA与SG信号重叠，提讫肝细胞膜忽视O-GlcNAc粘贴时，Hsp70 (Hspa1a) mRNA太大程度上集中都于SG中都。体外相结合YFP-flag-eIF4GⅠ和S68A性状质粒转染MEF肝细胞断定，HS后，S68A性状三组较WT三组维系了SG的聚合，说明HS游离eIF4GⅠ的O-GlcNAc粘贴囚禁了SG中都的持续性之外mRNA，从而无需其特异性译文。

上图4

5、eIF4GⅠ的N口通过O-GlcNAc粘贴起功用滚轮的关键作用【加强验证1】

基于OGT敲除的MEF肝细胞中都，包括eIF4GⅠ在内的常与当多受体O-GlcNAc粘贴发生变动。为提升论证的令人信服和繁复性，创作者利用CRISPR/Cas9相结合特异性隐另有eIF4GⅠ的a/b/c/d/e五种冠状病毒的肝细胞，分别另有或不另有Ser68及PABP1紧密结合核糖体。co-IP讫，另有Ser68的a/b冠状病毒可被O-GlcNAc共硫酸盐，即HS后发生O-GlcNAc粘贴的是eIF4GⅠN口。在Ser67密码子前填入A，构造框移性状，HS后eIF4GⅠ短链冠状病毒取代横贯冠状病毒，在忽视O-GlcNAc粘贴核糖体和PABP1紧密结合核糖体的情况下，Hsp70的多肽依旧活跃，但HS后eIF4GⅠ短链冠状病毒并不转变其盐类以及维系SG聚合的技能，即eIF4GⅠ与PABP1的常与互关键作用对于维系SG聚合至关重要，但对Hsp70的特异性译文非必需。相结合缺少性状的eIF4GⅠ，其不另有O-GlcNAc粘贴核糖体，但可与PABP1紧密结合，与填入性状的eIF4GⅠ（不另有O-GlcNAc粘贴及PABP1紧密结合核糖体）对比WB讫，HS后，缺少性状三组eIF4GⅠ钙减弱，形成了更多SG，且Hsp70的多肽增加，即在HS后的维持更进一步中都，SG的表征与mRNA的特异性译文是各派系的。

上图5

6、eIF4GⅠ变体对SG表征及Hsp70译文的挽救关键作用【加强验证2】

创作者试上图系统化rescue试验以使论证繁复，在体外相结合另有或不另有Ser68及PABP1粘贴核糖体的4种eIF4GⅠ质粒，转染eIF4GⅠ肝细胞。WB联合免疫荧光讫，转染WT eIF4GⅠ后维持了HS后Hsp70的隐另有以及SG聚合，转染S68A性状体后不能维持eIF4GⅠ敲除肝细胞的HS游离的Hsp70隐另有，M197和M457性状维持了eIF4GⅠ敲除肝细胞的HS游离的Hsp70隐另有，但不可维持SG聚合，证明了平稳的PABP1紧密结合核糖体并不是Hsp70特异性译文所需要的。

上图6

三、结论

eIF4GI和PABP1之间的动态常与互关键作用是抑制SG聚合和mRNA特异性译文的关键。在正常潮湿情况下下，eIF4GI和PABP1的持续共同点促进长袍依赖性的mRNA译文，同时在热持续性游离的译文受阻后触发SG聚合。持续性游离的eIF4GI的O-GlcNAc粘贴使PABP1表征，从而溶解SG，然后特异性译文持续性之外mRNA。eIF4GI作为一个功用滚轮，它是通过N口可逆的O-GlcNAc粘贴来控制与PABP1的直接常与互关键作用，从而各派系了SG的游离和持续性之外mRNA的特异性译文。

四、文章总结

文章论证详实，层层有序。从OGT敲除后，肝细胞膜Hsp70的酪氨酸本与受体质高度变动差别引出新译文抑制的共存。再利用co-IP与质谱技术根据受体对HS的敏感性及与Hsp70的年初出新现时序筛选了eIF4GⅠ作为译文抑制的核心受体，Ser68为唯一O-GlcNAc粘贴核糖体。随后，依据HS前后eIF4GⅠ与其常与互关键作用受体如PABP1、eIF4E常与互关键作用差别推论出新HS后，体外mRNA以非长袍依赖性方式译文算起，并根据HS前后eIF4E对OGT敲除三组Hsp70 mRNA高吸引力与低受体隐另有的不对应，推断持续性游离O-GlcNAc粘贴eIF4GⅠ不太可能囚禁了SG中都持续性之外mRNA，从而无需其特异性译文，并在WB与免疫荧光中都得出新结论。再次，为提升论证繁复性，创作者利还用CRISPR/Cas9编者肝细胞使其特异性隐另有另有或不另有Ser68或PABP1紧密结合核糖体的eIF4GⅠ冠状病毒，并用基因性状敲除eIF4GⅠ隐另有后转染各eIF4GⅠ冠状病毒质粒进行rescue实验。

原文链接：_4npFLCTngZu-9Q

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